开·云app体育登录入口 动物源性食品中寄生虫的检测——囊尾蚴

绦虫的幼虫是囊尾蚴，它寄生在宿主的横纹肌以及结缔组织内，呈现出包囊状，所以俗称为“囊虫”。囊尾蚴在动物体内寄生有着多种类型，传播到人类身上通过肉制品的有猪囊尾蚴和牛囊尾蚴，其中猪囊尾蚴更为常见。囊尾蚴病在全球范围内分布，在发展中国家更为多见的原因如下：发展中国家卫生基础设施不完备这一状况下，囊尾蚴病在猪群和人群中的发病率很高，进而引发了巨额的经济损失。最近几年，因为移民以及前往国际旅游人数上升，囊尾蚴病在工业化发达国家里的发病率也出现了增长。1993年，WHO将猪囊尾蚴病列为需要根除的六大疾病之一。

1 病原学特征

舌肌，咬肌，臀肌，深腰肌，膈肌，这些部位中多有囊尾蚴寄生。，其外观是椭圆形囊泡状，大小为（6～10）mm×5mm，囊内充满着液体，囊壁是一层薄膜，壁上有一圆形粟粒大的乳白色内陷头节，在这头节上有4个吸盘，有的囊尾蚴在头节的顶端有顶突，在顶突最前端有诸多角质小钩，分两圈排列。囊尾蚴因外观目视可得，呈乳白色，半透明状，绿豆或黄豆那般大小，故而被称作“米猪肉”或“豆猪肉” 。

2 流行病学特征

一种人畜共患病，也就是又被称作猪囊虫病的猪囊尾蚴病，主要是在猪与人之间进行传播，该病的流行和人的生活习惯关联极大，可以说有着密切关系。猪囊尾蚴所对应的成虫乃是指猪带绦虫，在其中特定情形来讲是人成为了猪囊尾蚴的唯一终末宿主，那么可以说明猪囊尾蚴病的感染来源仅仅只是小肠内带有猪带绦虫寄生的病人。猪作为猪囊尾蚴的中间宿主，猪带绦虫病的感染来源则是携带猪囊尾蚴的病猪，另外需要特别指出的是，人同时还能够作为中间宿主进而感染猪囊尾蚴病。对于猪患囊尾蚴病呀，则主要缘由是猪处于散养状态，或者人的粪便管理方面并不严格等情况，进而致使猪吃到被猪带绦虫病人粪便里的孕节或者虫卵，以此而染上猪囊卵尾病虫这一病症。人感染囊尾蚴病的原因主要存在两类：其一呀，是经过口腔进行感染。人在饮食之际摄入被绦虫卵所污染的食物以及水，诸如使用掺和人粪的水去浇灌菜地，人在进食之时食用了未曾洁净的粘连有虫卵的蔬菜从而导致患病，或者某位患有猪带绦虫病的当事人方便之后未洗手或者洗手之举并不彻底干净完成这种行为操作动作之后，误吞入沾污在自己手上的虫卵进而感染了猪囊尾蚴病患病症。其二情形呢，是自身出现的带有病菌的源头滋生感染。小肠内存在猪带绦虫寄生的病人，于某些情形下，猪带绦虫之中，脱落后的节片逆向行向胃部，经过消化道以内所具消化液起到的诸多作用效果，虫卵的卵壳被消化掉，进而那些幼虫朝着各样形形色色的组织器官进行移行运动，此举会致使人体感染猪囊尾蚴病 。

囊尾蚴在全球范围分布着，然而主要流行于亚洲、非洲、拉丁美洲里一些国家以及地区。在我国，除东北、华北和西北地区，还有云南和广西部分常发的地区以外，别的地区都是散发情况，长江以南地区比较少，东北地区感染率是较高的。我国除浙江省之外的省份，都有带绦虫感染病例的报道。近些年来，各地感染人数呈现出增加的趋向，感染率比1990年上升了52.47％，其中西藏、四川这两个省份的感染率分别上升了97％和98％，牧民主要因为生食牛肉从而感染牛带绦虫病。猪带绦虫病当中，黑龙江的感染率是最高的，牛带绦虫病方面，西藏占据首位，个别地区的感染率竟然高达70％以上。

3 危害

囊尾蚴病能够感染猪，也能够感染人，其人群感染率低，然而猪感染率较高，在我国各个省份都有发生以及流行，呈现散发情形，个别地区呈现地方性流行，其中东北、华北、西南地区是最为主要的流行区域，但猪囊尾蚴病对猪的危害主要在于妨碍猪的生长以及发育，尤其是影响幼龄猪的生长 。易于察觉临床状况且可进行诊疗操作的猪囊尾蚴病属于轻症范畴，只有对遭受到严重感染的猪来说才会呈现出相应症状诸如肌肉僵硬，肩部肌肉水肿致使两肩增加宽度，臀部隆起，显得异常肥胖，身体中部却窄细，呈现出狮状体样态或者哑铃状。要是囊尾蚴在猪舌中存在寄生情况，那么咀嚼、吞咽便会出现困难；寄生部位若为咽喉，声音就会变得嘶哑：寄生在眼球位置时，视力会变得模糊；寄生在大脑时，会呈现痉挛状况，亦或是因急性脑炎情形突然面临死亡。这种疾病不但严重地对养猪业的发展产生影响，给养猪业造成颇为巨大的经济损失，而且还对人类身体健康构成威胁 。人的囊尾蚴病，会大幅提升人感染猪带绦虫的概率，猪带绦虫会在小肠里附着生存，进而致使病人呈现贫血、消瘦、腹痛、消化不良以及腹泻等状况；与此同时，囊尾蚴寄生于人体各个组织器官中能对人体造成损害，这种损害程度跟其寄生数量以及寄生部位有联系。囊尾蚴在人体肌肉寄生存会引发酸痛与僵硬化现象；在脑内寄生会出现神经方面的症状，比如抽搐、癫痫、瘫痪说不定还会死亡；压迫到眼球会让视力下降甚至致使看不到东西。其中，脑囊尾蚴病危害最为严重，在发展中国家，它是继发性癫痫症最为常见的病因所在。全世界范围内，脑囊尾蚴病患者数量约为5000万，其中超过80％的患者生活于低收入以及中低收入国家，每年因该病死亡的人数多达5万余人 。

一种在猪与人之间形成了互为因果、循环感染状况的寄生虫病症，是猪囊尾蚴病与人猪带绦虫病。要是卫生环境防治举措处于松懈状态的话，便将致使恶性循环态势出现。患人猪带绦虫病的患者每日都朝着外界排出孕节以及虫卵，并且这种排出状况能够持续好几年时间乃至二十大几的年份，如此一来猪会长时间陷于威胁的范畴之内。人属于猪囊尾蚴的独一无二的终末宿主，感染猪带绦虫主要是以饮食方面的卫生习惯、烹饪与食肉相关方法作为决定因素。人由于吃进了带有活囊尾蚴的猪肉或者被污染的那些食物从而感染猪带绦虫病。居住在流行区的居民，喜欢食用生来的或者没有熟透的猪肉、牛肉，这对于绦虫病的传播起着具有决定性意义的作用。人得了囊尾蚴病是因人为吃下了遭到猪带绦虫卵污染的食物，或者是猪带绦虫病患者进行自体感染所引起的结果，患猪带绦虫病的病人当中有16％～25％会同时并发囊尾蚴病。所以囊尾蚴病是属于严重危害人体健康的寄生虫病当中的一种。

4 国内外卫生要求

遵循《畜禽屠宰卫生检疫规范》（NY467 减去 2001）所规定的要求，屠宰生猪之时，囊尾蚴所涉及的主要检验位置为咬肌，以及深腰肌、膈肌，其他可以进行检验的部位有心肌，还有肩胛外侧肌、股部内侧肌等。按照国家标准 GB16548 减去 2006里面相关的规定，那种“发现囊尾蚴以及钙化虫体的情形下，全尸必须用作工业用料或者直接进行销毁。的情况” 。

5 检测方法

5.1 病原学检测

5.1.1 活畜检测

猪囊尾蚴进行活体检查时，其主要检查的部位是舌肌以及眼外肌 ，如果要对猪的舌肌活体检查，那么首先要运用特制的开口器或者木棒这些工具来撬开猪嘴 ，然后拿出一块粗布垫在手上将猪舌头拉出来 ，接下来要仔细观察猪舌头情况 ，并且还用手触摸舌的底部、舌身侧面以及舌根部 ，看看有无囊结 ，触摸时能够感觉有恰似大豆那样大小且带着弹性的结节那就可为囊结 ，针对舌肌检查囊结的检出率约为30％ ，而当检查眼外肌的时候 ，需用拇指与食指把眼结膜以及外在软皮捏住 ，一旦感觉有突起的物体 ，就可初步判断为囊结。

5.1.2 屠宰后肉品检测

猪在宰后接受检验之际，依照《肉品卫生检验试行规程》所提出的要求，需将咬肌、舌肌、心肌、深腰肌等部位切开，于此可见呈现出豆粒或者米粒那般大小的囊泡，呈现椭圆形，具备白色透明之态，囊的内部含有半透明状的液体以及像米粒一样大小的白色头节。把皮下结节挑选出来，将外层纤维被膜予以剥除，把虫体直接置于镜下展开观察，囊壁分为两层，外层是皮层，内层是间质层，且间质层有一块往囊内增厚进而形成向内翻卷收缩的头节，它的构造与成虫的头节极为相似。要是有必要的话，要进行压片、固定、脱水、透明、染色之后再做鉴定。

5.2 皮内变态反应

制备新鲜猪肉中囊尾蚴头节研制成如同1∶100形式模样的悬液，将此悬液注入待检猪耳朵外面皱褶地方偏里皮内0.1至0.2mL，在5min之后开始呈现反应，进行判断，若注射之处发生红肿，且直径在11mm以上，于45min之后开始消退，那么这就是阳性反应，假若没有产生上述这种似的反应或者有的反应但不显著的此为阴性。

5.3 血清学检测

囊尾蚴病原学诊断的过程是比较烦复杂乱的，要获取准确无误的诊断结果是存有困难的，很容易出现遗漏检查这种状况，所以血清学以及免疫学检测方法常常被用来帮助囊尾蚴进行诊断与鉴定。实验室诊断猪囊尾蚴病的办法主要有补体结合反应，沉淀反应，间接红细胞凝集试验以及酶联免疫吸附试验等。补体结合反应在很早的时候就被运用到囊尾蚴病诊断当中了，然而因为假阳性概率太高进而逐渐被其他方法给替代掉了。沉淀反应包含液相沉淀反应以及固相沉淀反应，运用这个方法来对囊尾蚴病做诊断存在检出率太过低下的不足之处。目前常用的检测方法为间接红细胞凝集试验和酶联免疫吸附试验。

5.3.1 间接红细胞凝集试验

以红细胞当作免疫配体的载体，且以红细胞凝集读数的血清学方法，是间接红细胞凝集试验（IHAT）。最常用的红细胞是绵羊红细胞或者人（O型）红细胞，其来源便利。目前都用醛化红细胞，它能够保存半年却不失去免疫吸附性能。操作步骤如下：

红细胞要历经鞣化以及致敏步骤，先取醛化红细胞，用0.15mol/L的PBS（pH7.2）进行离心洗涤动作，重复2次，之后把沉淀之用PBS配制成2.5％的悬液；接着加入等量的1∶2000鞣酸溶液，因鞣酸不同批号，质量相差较大所以必须预试测定适宜浓度开·云app体育登录入口，在37℃的环境下孵育20min，期间要经常进行摇动操作；随后通过离心去除上清液，紧接着用PBS洗1次，再用0.15mol/L的PBS（pH6.4）配制成10％悬液；再往每份悬液里加入等量的适当稀释的抗原液，放置在37℃的水浴箱中30min，期间每5min振动1次，完成后离心去除上清液，再用PBS（pH7.2）洗2次，最后用含有1％正常兔血清（NRS）以及10％蔗糖的缓冲液配制成5％细胞悬液。使用加0.1％叠氮化钠进行防腐处理，将其存放于4℃或采用减压冻干的方式备用来用，对于每一批致敏细胞而言，都一定要利用已知的具有阳性以及阴性的血清去滴定灵敏度或者特异性，阳性滴度需要在1∶640以上情况之下，阴性血清未出现反应的才可以使用。

（2）微量血凝试验，在U形（或者V形）微量血凝板之上进行，把被试血清，使用1％NRS或者牛血清白蛋白（BSA）生理盐水来做倍比系列稀释，每一个孔所包含的稀释血清为0.05mL。每一个孔添加0.01mL致敏红细胞悬液（可采用标定过的注射器针头来滴加），周全地振荡摇匀，加盖后于室温静置1至2h读取结果。

是按照红细胞在孔底的沉积类型来确定的。“－”这种情况，红细胞会沉于管底，呈现出圆点形状，而且外周是光滑的；“±”的情况呢，红细胞会在管底沉积，其周围并不光滑，或者中心存在白色小点；“＋”的时候，红细胞沉淀范围十分小，呈现的是较显然的环形圈；“＋＋”意味着，红细胞沉淀的范围比较小，它的当中能够出现浅浅的环形圈；“＋＋＋” ，红细胞会布满整个管底，看起来像毛玻璃一样；“＋＋＋＋”情况下，红细胞呈现为片状凝集或者边缘出现卷曲。呈现明显阳性反应 （＋）的最高稀释度便是该血清的滴度或者效价 。间接红细胞凝集试验，用于检测脑脊液，或血清抗体滴度，当该滴度大于正常参考值上限时，也就是血清凝集滴度小于1∶8，脑脊液小于1∶2，此时则可诊断为脑囊虫病，其阳性率为78％～91.4％。

5.3.2 酶联免疫吸附试验

当前，尾蚴病最为可靠的诊断办法乃是酶联免疫吸附技术。起初建立的酶联免疫吸附试验，也就是 ELISA，被广泛用于猪囊尾蚴病的诊断之中以此处范围来看，它是基于早期建立的酶联免疫吸附试验的基础上，之后又研发出了斑点酶联免疫吸附试验以及生物素亲和素酶联免疫吸附试验还有抑制性酶联免疫吸附试验这一系列方法。另外，还成功研发出运用酶联免疫原理与胶体金层析技术所制备的囊尾蚴病快速诊断金标试纸条技术。酶联免疫吸附试验具备检出率高和特异性强以及稳定性好这些特点，已然被列入我国动物检疫规程，下面详细说明其具体操作步骤：

将10cm×1cm普通滤纸条的一端，标记被检猪号码，从被检猪任何部位吸取1至2滴血液到另一端，于室内阴干之后，把此置于4℃冰箱内，这被检猪全血血片可保存6个月。

（2）取抗原包被液来洗涤ELISA反应板各个孔，并且要洗足3次。接着，拿抗原包被液把抗原按照使用说明书要求稀释到工作浓度，而后添加到ELISA反应板各个孔当中。每一个孔添加0.1mL，之后盖上盖子，放置在室温（11～29℃）的环境下，度过一个夜晚。

拿出包被过夜的 ELISA 反应板 ，将板孔内的抗原包被液用力甩净 ，在每一个孔里加入洗涤液 ，对其浸泡 3 分钟 ，而后将洗涤液重重地甩去 ，再用滤纸把残留的洗涤液吸掉 ，同时把孔内的气泡驱赶出去 ，接着再次加入洗涤液 ，依照相同的方式总共洗涤 3 次 ，也就是 3 次 ，每次 3 分钟的冲洗 。 ?

将被检查的血片裁减成 1cm×1cm 大小，把标准阴性血片也剪成同样大小，再把标准阳性血片同样剪成 1cm×1cm 尺度，之后把它们分别放置到青霉素瓶的内部，针对每一片 1cm×1cm 的血片加入 0.3mL 稀释液体予以浸泡，历经 20 分钟就好，即在血片变成白色即可完成该操作流程，有标点。

每5项中1项内每份被检血片浸液要加2孔添加，而且每孔添加量为0.1mL 对么。紧接着呢需要在标准阴性以及标准阳性对照孔那里添加与之相互对应的血片浸液且添加量为2孔呀，而且仍是每孔0.1mL呢。随后空白对照孔要添加稀释液共2孔云手机网页版，每孔添加量同样是0.1mL哟。添加完样品之后要加盖，再放置于相对室温（11～29℃）下整整30min，之后按照（2）里提到的方法使用洗涤液去洗涤呢。

辣根过氢化物酶标记的金黄色葡萄球菌蛋白A，也就是HRP - SPA标准物，依照使用说明书，用稀释液将其稀释到工作浓度。有被检孔、标准阴性孔以及标准阳性孔，在每一个孔当中加入HRP - SPA标记物0.1mL。空白对照孔同样加入0.1mL。加完之后盖上盖子，在室温，也就是11～29℃的环境下放置30min，之后按照（2）所讲的方法，用洗涤液进行洗涤。

（7）往每一个孔当中，加入刚刚现配制好的底物溶液，其量为0.1mL。然后，将其放置于室温，此室温范围是11～29℃，放置的时长为10min 。

（8）每孔加终止液2滴，以终止反应。

判定检测结果，需在对照孔成立的前提下，也就是标准阳性孔呈深黄色，标准阴性孔呈无色或浅黄色，空白孔呈无色，对此进行判定。首先进行目测判定，将其与标准阴性孔相比较，若颜色深于标准阴性孔，那么就判定为 ELISA 阳性病猪（＋）。再者还能够用酶联免疫检测仪进行判定（490nm 的波长处）。使用空白对照孔来调零，由此测定被检孔的 OD 值。若OD小于或等于0.22，那就判定为ELISA阴性（－）；要是OD大于或等于0.26，便会判定为ELISA阳性（＋）；当OD处于0.23至0.25这个范围的时候，判定为ELISA疑似（±） ，对疑似者重新检测一次 ，倘若依旧为疑似那就判定为阳性了。

囊尾蚴抗体检测仅仅反映有寄生虫存在，然而抗原检测能够表明体内处于活状的寄生虫存在，最理想的那种状况当属两者的结合试验，血清学试验所运用的各类天然抗原源自囊液，同时这些天然抗原还能够作为具备效用的血清学筛查工具，不同的方法采用不同的可溶性抗原致使试验结果难以进行对比。囊尾蚴病检测所用到的抗原，大多属于猪囊尾蚴囊液粗抗原或者层析纯化抗原，其主要涵盖以下几种类别，第一个类别是小扁豆凝集素纯化抗原成分，就是猪囊尾蚴13ku、14ku、18ku、21ku、24ku、39至42ku或者50ku糖蛋白，第二类是囊尾蚴囊液抗原成分，第三类是头节囊壁抗原成分。

感染囊尾蚴此事件发生于人与动物身上之后，于血清之中，于脑脊液之内，于口水当中或者乃至泪液里面，皆能够去将与之对照应的抗体检测出来。放射免疫这种技术，血凝试验此项方法，胶体金这类手段，补体结合此一做法，酶联免疫反应此反应过程，以及免疫印迹技术此技术做法等，已经被运用起来用以检测遭受感染之人或者有关动物的囊尾蚴病抗体。最开始时抗此成分源出于囊液，源出于排泄物及其分泌物（ES）该类产品或者源于粗质地匀浆质地之物体这些，而这些并未实施纯化的抗原在敏感性方面以及在特异性层面均欠佳，容易出现虚假呈现阳性、虚假呈现阴性以及存有交叉反应这类状况；所以去开展并使用经过提纯的抗原又或者是于囊液里面寻觅独特性质的抗原 。当前，特异性最为出色的办法乃是酶联免疫电转移印迹，也就是EITB技术，最初被报道时具备100％的特异性、98％的敏感性。然而，此种方法于大脑单囊肿病的诊断里，敏感性出现了大幅的下降。Prabhakaran等人报道了一种灵敏的免疫诊断方法，此方法乃是采用尿素诱导出的扁豆凝集素的三级构象。运用这种方法针对60例猪囊尾蚴病的患者展开诊断，检测出其中46％的患者血清当中存在抗体，而采用标准免疫印迹诊断方法检测时则呈现为阴性。可以直接买到这个商品化的EITB试剂盒，它已被广泛用于诊断人类和猪囊尾蚴病，不过该方法存在一定弊端，像抗原来源无法保证，抗原制备困难，抗原彼此存在差异，探针杂交技术成本昂贵等。为解决这些问题，对这些抗原进行鉴定、分析且人工合成，进而用LISA进行猪囊尾蚴病的诊断测试。经ELISA检测意识到，这些合成的蛋白质，其特异性和敏感性远远低于天然的糖蛋白抗原（LLGP）蛋白。Prasad报道了一项免疫诊断技术，是什么技术呢，是检测囊液抗原诱导的一种反应。什么反应呢，是淋巴细胞增殖反应的技术。该技术是基于囊肿液抗原的，怎么检测呢，通过淋巴细胞增殖试验来衡量。衡量什么呢，是囊尾蚴刺激机体产生的细胞免疫反应。研究人员进行了报道，说测试组48个，其相应的特异性和敏感性的情况如何呢。对照组是79个，它们在这方面又怎样呢。测试组的特异性和敏感性分别为93.8％和96.2％，而相应对应的对照组则分别是其他的数据情况。 。

检测囊尾蚴的又一方法是做抗原检测，当下科研人员构建了不少检测方式来检测血清中的囊尾蚴抗原，B158/B60与HP10这俩单克隆抗体经验证后用于常规检测囊尾蚴抗原，据说其敏感性颇高，血清样品达80％，脑脊液达90％ 。在针对猪囊尾蚴病所开展的流行病学相关调查当中，研究人员对B158/B60以及HP10的灵敏度与特异性予以了统计，B158/B60的灵敏度是84％开·云体育app下载安装，HP10的灵敏度是76％，B158/B60的特异性是55％，HP10的特异性是83％。B158/B60在用于人类的尿抗原检测之时，同样具备良好的诊断性质的性能，其对于寄生虫的敏感性是92％，不过单囊尾蚴感染的病例情况下这个敏感性下降到了62.5％。存在只有钙化的囊尾蚴的大多数病人，也就是83％的这类病人，检测得出的结果为阴性。血清的诊断结果与尿液的诊断结果一致性极其突出，相当良好，所以在检测的进程当中能够采用尿或者唾液当作诊断的样品去替代脑脊液以及血清样品，这样子能够大幅度地简化囊尾蚴病的筛检流程。